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0Annexin V是一种高效的蛋白质,广泛应用于细胞生物学研究。它具有高亲和力,能够特异性地结合到外翻的磷脂酰丝氨酸(PS)上,这一现象在细胞凋亡早期阶段尤为明显。因此,Annexin V已成为检测细胞凋亡的标准工具。 荧光标记的Annexin V更是如虎添翼,通过与不同颜色的荧光染料结合,研究人员可以在流式细胞术和荧光显微镜等技术中,轻松、高效地检测和分析细胞凋亡。 Annexin V有以下几个优点: 1. 高灵敏度和特异性:荧光标记的Annexin V能够准确识
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0一、百萤iFluor 560-dUTP*1mM TE 缓冲液(pH 7.5)*参数 Ex(nm) 560 Em(nm) 571 分子量 N/A 溶 剂 Water 存储条件 在-15℃以下保存,避光防潮 外 观 液体 二、百萤iFluor 560-dUTP*1mM TE 缓冲液(pH 7.5)*概述 iFluor 560-dUTP 是一种 iFluor 560 修饰的核苷酸,可用于各种分子生物学应用,例如 DNA 分子的标记和检测。它包含通过连接臂连接到脱氧尿苷三磷酸 (dUTP) 分子的 iFluor 560 染料。当在合成过程中掺入 DNA 时,iFluor 560-dUTP 可以使用荧光显微镜或其他基于荧光的测定法进行可视化。它常
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0质粒提取通常采用强碱裂解法,该方法由Birnboim和Doly在1979年发明,至今已成为实验室常规操作之一。今天给小伙伴们详细介绍在质粒提取过程中使用的不同溶液及其原理: 溶液P1 组分:25 mM Tris-HCl(pH 8.0),10 mM EDTA,50 mM 葡萄糖 作用:使菌体沉淀悬浮,Tris-HCl作为缓冲溶液维持pH稳定,EDTA螯合金属离子抑制DNase活性,葡萄糖增加粘度助于菌体悬浮。 溶液P2 组分:250 mM NaOH,1% SDS(十二烷基硫酸钠) 作用:细胞裂解,NaOH破坏细胞膜结构导致细胞裂解,
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130000核酸电泳常见问题 1. 无条带或条带较弱 (1)上样量不足 尝试进一步增加上样量。 (2)核酸降解 在核酸提取和电泳过程中,使用分子生物学等级试剂,切勿使用含核酸酶的耗材,避免核酸酶污染。 (3)电泳缓冲液使用不当 TAE缓冲液短期内更适用于分离大片段,长时间运行易产热;TBE缓冲液对于更短片段更好,适用于长时间运行而不易导致过热,但可能会减缓线性dsDNA的迁移。 (4)DNA跑出凝胶 DNA小片段分子量较小,迁移速率快,容易跑出凝胶。可0求D-Hanks配方5蛋白酶消化液配置步骤 1.D-Hanks液高压灭菌之后,晾至室温,4℃保存备用。 2.称取一定量胰蛋白酶粉末于研磨器中(夏天时研磨器应放在冰浴中),加入少量D-Hanks液研磨1 000次左右,调制成糊状。再放入4℃预冷的适量D-Hanks液中,4℃下磁力搅拌使完全溶解。 3.用NaHCO3干粉将胰酶溶液的pH值调至8.0左右(胰酶作用的最适pH值),并加入0.02%EDTA以协助消化作用。 4.滤过除菌,-20℃冻存。 蛋白酶消化液配置过程中的注意事项: 1.BSS的pH值应确定为7.2左右。 20在进行液体制剂的制备时,为了确保最终溶液达到预期的pH值和精确浓度,我们通常遵循以下步骤: 调节pH值:首先,我们需要将所需的溶质溶解在部分溶剂中,然后逐渐加入酸或碱来调整溶液的pH值至所需水平。在这个过程中,要不断地测量pH值,直至稳定在我们预定的数值。 定容到全量:pH值调节完成后,接下来就是定容操作。我们将溶液转移到容量瓶中,慢慢地加入溶剂,直到液面恰好与容量瓶的标线对齐。要注意的是,加溶剂的过程中要小心谨0111求人软骨细胞C-28 I2或者是ATDC5 cells2求E0771细胞,可与本实验室4T1等其他细胞互换!!!00冷门基因抗体,只有组化对面抗体,用来泡wb跑不出条带来怎么办0001 蛋白酶抑制剂 蛋白酶抑制剂的作用是什么? 蛋白质纯化、提取过程中常受到其本身存在的水解酶的影响。在提取蛋白质的过程中细胞破碎释放出蛋白酶,这些酶在与欲提取的蛋白质接触时,一旦条件适宜,就会发生反应,导致蛋白质分解。因此,在蛋白质提取过程中,需要加人蛋白酶抑制剂以防止蛋白质水解以保持蛋白质的完整性。 蛋白酶抑制剂的作用原理是什么? 蛋白酶抑制剂(protease inhibitor)从广义上指与蛋白酶分子活性中心上的一些基团00流动相是影响液相色谱的关键因素。一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液,但是如何配制。选择配制的方法不同,分析结果特别是保留时间,是会有显著差别的。高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液,水性溶剂也常用于缓冲液。常因资料上表示的内容和实际的配制方法不同,而产生流动000巨噬细胞极化是指巨噬细胞在不同微环境刺激下改变其表型的过程。巨噬细胞通常极化为 M1 或 M2 两种表型,分别释放促炎或抗炎因子,发挥不同的功能。M1型巨噬细胞由 Th1细胞因子(TNF-α、IFN-γ)和细菌成分(脂多糖等)诱导,活化的 M1 巨噬细胞吞噬并破坏微生物,清除肿瘤细胞,并将抗原呈现给 T 细胞以引起适应性免疫反应。M2型巨噬细胞由 Th2细胞因子(IL-4、IL-13)诱导,主要发挥抗炎和组织修复的作用,参与伤口愈合、血管生成和纤维化等过程0在生物学和心理学领域,旷场实验作为一种常用的行为学测试方法,被广泛用于评估动物的情绪状态、探索行为以及焦虑水平。然而,尽管这一实验方法看似简单直观,其实在实际操作中却涉及诸多细节和注意事项。为了确保实验结果的准确性和可靠性,我们必须对旷场实验的各个环节进行严格控制。 旷场实验的设计和实施需要考虑动物的特性。动物的昼夜节律、性别差异以及先前的处理经验都可能对实验结果产生影响。因此在进行实验前,我们需0000免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术 (immunocytochemistry) 是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原 (多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究。它是组织化学的分支,它是用标记的特异性抗体 (或抗原) 对组织内抗原 (或抗体) 的分布进行组织和细胞原位检测技术。 一、免疫组化技术的基本原理 应用免疫学及组织010实验技能分享免疫荧光 免疫荧光(Immunofluorescence,IF)是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一种强大的技术。它的原理是利用荧光标记的抗体作为探针对组织或细胞内的特定抗原进行定位和定性的分析。IF是一个很好的检测技术工具,用于研究感兴趣的产物如分子、蛋白质或糖蛋白的表达、定位、分布和迁移。 免疫荧光检测方法 直接免疫荧光:携带荧光素的抗体直接与抗原反应,形成抗原—荧光素标记抗体复合物。该法优点是较0t值是什么? qPCR扩增过程中,扩增产物的荧光信号达到设定的荧光阈值时的所对应的扩增循环数(Cycle Threshold)。C代表Cycle,T代表Threshold。简单讲,Ct值就是qPCR中起始模板扩增达到一定产物量时,所对应的循环数。 为什么要有Ct值? 模板量与Ct值的关系: 在PCR指数扩增过程当中,产物量与循环数之间的关系是:扩增产物量=起始模板量×(1+En)循环个数。 Ct值的设定: qPCR扩增产物量是以荧光信号的形式直接呈现,也就是扩增曲线。在扩增过程当中,000Western blot是一个非常基础的实验,但是着实让我们头疼,即使是老手也挡不住WB实验的千锤百炼,懂得都懂,下面小编根据经验总结一篇WB实验过程会遇到的常见问题及解决方案,希望对正在做WB实验的小伙伴提供一个避雷参考! 无条带 1.蛋白表达量低:充分了解研究的蛋白,表达量低适当增加上样量,20-50μg。 2.本底表达还是诱导表达,非特异性条带。 3.样本提取蛋白使用蛋白酶抑制剂,磷酸酶抑制剂,并设置对照,避免蛋白降解。 4.检查一抗特异性0000细胞因子是由免疫细胞(如单核、巨噬细胞、T细胞、B细胞、NK细胞等)和某些非免疫细胞(内皮细胞、表皮细胞、纤维母细胞等)经刺激而合成、分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质。其作用是通过结合相应受体调节细胞生长、分化和效应,调控免疫应答。细胞因子,是细胞分化和行使功能时的产物,相当于人体内各类细胞间相互交的“信使”。它们被广泛地应用于医学诊断、抗癌治疗、免疫调节、以及自身免疫等多种领域。 常见细胞因000Western blot的洗液TBST是实验室常用的配制液体,对于TBST的配方也基本上相差不多,其中配方中就有一种组分是Tween-20,一种黄色或琥珀色澄明的油状液体,具有特殊的臭气和微弱苦味。用移液枪吸取时会有一种滞后感。为什么在Western blot的洗液TBST中要加入这么一种试剂,Tween-20在Western blot 中在发挥什么样的作用呢? 1、Tween-20 首先了解一下什么是Tween-20。Tween-20也写作Tween 20,也称Polyethylene glycol sorbitan monolaurate,中文名为吐温-20或吐温20。Tween-20为黄色或0细胞迁移(Cell migration):因其类似体外伤口愈合过程,又名伤口愈合实验(Wound healing assay),是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。可用于可以观察药物、基因等外源因素对细胞迁移、修复和相互作用的影响。 基本原理:在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕/伤口”,划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕/伤口”愈合,于细胞迁移过程中在开始和定期捕获图像,通过测量不同时间点的划痕间距并0免疫组织化学技术:检测组织原位表达的肽类、激素、神经递质、细胞因子、受体、表面抗原等抗原性物质。 免疫 immuno- 抗原抗体的免疫反应 组织 histo- 检测组织中表达的抗原性分子 化学 chemistry 酶促/荧光可见反应 (一)组织和细胞标本的准备 1.组织标本的取材 —— 取材新鲜,固定及时,形态完好。 2. 细胞标本的准备 (1)活体细胞标本: 印片法、穿刺吸取法、沉淀法 (2)培养细胞标本: ① 细胞涂片: 将细胞制成悬液(10^6)涂在 涂有切片粘合