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(1)膜没有完全均匀湿透 使用100% methanol浸透膜。 (2)洗膜不充分 增加洗液体积和洗涤次数。 (3)阻断不充分 增加封闭液孵育时间，或者提高温度。选择合适的封闭试剂（脱脂奶粉，BSA，酪蛋白等）。 (3)二抗浓度过高 降低二抗浓度。 (4)检测过程中膜干燥 保证充分的反应液，避免出现干膜现象。 (5)曝光过度 缩短曝光时间。 (6)抗体与阻断蛋白有交叉反应 检测抗体与阻断蛋白的交叉反应性，选择无交叉反应的封闭剂。洗涤液中加入Tween-20可减少交叉反应。

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