内参基因的表达水平在不同样本间相对稳定，因此可以用来标准化样本，校正实验数据，消除实验中因上样量不同，操作不同等实验操作产生的误差，确保实验结果的准确性。 让我们透过一个实验案例来探究内参基因与相对定量分析之间的联系。 评估肝癌细胞中A基因的表达量与正常肝细胞的相对变化。通过荧光定量检测，我们得知：肝癌细胞的A基因CT值为25，而正常肝细胞的A基因CT值为26。据此，利用表达量倍数的计算公式，我们得出肝癌细胞的A基

今天聊下玄学实验-Western blot，如果在实验中没有观察到阳性条带或者条带较弱，可能有多种原因导致这种情况。以下是一些可能的原因及其解决方法： 1 蛋白质表达量低：目标蛋白在样本中的表达量可能低于检测限，导致条带弱或不可见。 解决方法：使用更多的细胞或组织样本，或者增加蛋白的加载量。 2 不适当的抗体：使用的一抗或二抗可能特异性不强，或者稀释比例不当。 解决方法：验证抗体的特异性，优化抗体稀释比例。 3 样本处理不当：样

通过研究蛋白质与蛋白质之间的相互作用，我们能更好的了解细胞的生命活性，揭示隐藏在表象下的调控机理。 我们的团队在蛋白质相互作用领域具有丰富的研究经验。采用IP、co-IP、ChIP、RIP、pull-down等实验技术以在生物学和分子生物学研究中研究蛋白质的相互作用、DNA与蛋白质的结合以及RNA与蛋白质的相互作用。 这些实验技术可以从检验的出发点来区分：co-IP、ChIP、RIP是利用已知的蛋白去检测机体内的相关蛋白、DNA、RNA，并通过蛋白抗体免疫沉淀

1.处理材料 a.如提取材料为血液，可直接使用200μl新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，不足200μl可加缓冲液GA补足； 注意： 如需处理更大体积血液，如300μl-1ml，应按以下步骤操作：在样品中加入3倍体积红细胞裂解液（例如，300μl血液加入900μl红细胞裂解液），颠倒混匀，室温放置5min，期间再颠倒混匀几次。10000rpm(~11,500×g)离心1min（若离心机最高转速不允许，可3000rpm(~3,400×g)离心5min），吸去上清，留下白细胞沉淀，加200μl缓冲液GA，振荡至彻底混匀

Western Blot是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中最常用的一种实验方法，WB的原理很简单——各电泳分离的细胞或组织蛋白转移到PVDF/NC膜上，用特定抗体结合蛋白抗原，再结合标记的二抗似化学发光的方式可视化地将蛋白表达情况呈现在人们面前。 常见问题举例分析：1、蛋白电泳条带异常 “微笑”条带 条带拖尾 条带模糊 原因:凝胶不充分;电压过高;温度过高;电泳速度过快 建议:待充分凝胶后再电泳;降低电压;低温电泳:减慢电泳速度 原因:凝胶浓度

“出现杂带”以及“条带位置不符合预期”，这两种情况需要分开讨论： 第一种情况：蛋白转录及翻译后的修饰，该因素是引起杂带的最常见原因。转录后，由于选择性剪切的作用，同一个转录本会翻译出不同大小的蛋白，这类蛋白称为该蛋白的剪接体。在UniProt查询蛋白时，可以在“Sequences ”部分看到该蛋白已报道过的Isoforms。在进行实验前，需要比对每个剪接体造成的变化是否影响了目标蛋白的对应结构域，进而 判断本研究种涉及的蛋白到底应该

聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR)是利用一段DNA为模板，在DNA聚合酶和核苷酸底物共同参与下，将该段DNA扩增至足够数量，以便进行结构和功能分析。PCR检测方法在临床上快速诊断细菌性传染病等方面具有极为重要的意义。 PCR为最常用的分子生物学技术之一。至今在世界范围内都有广泛的应用，作为生物学实验的一个重要的方法，其有着不可估量的作用。 简单来说分为以下三个步骤： ✦ DNA变性，加热使靶DNA序列双链解离成单链DNA。 引物与靶DN

1.组织包埋 （1）乙醇脱水：组织经不同浓度的乙醇溶液进行逐级脱水 70％ 80％ 90％ 95％ 100％ 100％，各级乙醇 40min（注意：骨性及钙化组织需在JYBL-Ⅱ脱钙液中浸泡24h，待组织软化后再进行乙醇脱水步骤）； （2）透明：组织依次浸泡于三个二甲苯中，每缸各1h； （3）浸蜡：组织依次浸泡于三个石蜡缸中，每缸各1h； （4）包埋：将液态的石蜡倒入模具盒中，再将浸好蜡的组织块平放底部，注意切面方向朝下放置，待石蜡凝固后去掉包埋框，完全冷却变

PCR反应中的主要由引物、 4种三磷酸脱氧核苷酸(dNTP)、Mg2+、模板和Taq DNA聚合酶五个成份组成。各个组份都能影响 PCR 结果的好坏。 1 引物 PCR反应产物的特异性由一对上下游引物所决定。引物的好坏往往是PCR成败的关键。引物设计和选择目的DNA序列区域时可遵循下列原则： （1） 引物长度约为16-30 bp， 太短会降低退火温度影响引物与模板配对，从而使非特异性增高。太长则比较浪费，且难以合成。 （2）引物中G+C含量通常为40%-60%，可按下式粗略估计引

如果有需要检测动植物色素、激素、维生素、代谢组学等测定，可以选择可靠的科研检测机构。优选生物，13年老品牌，为高校/科研院所服务，有专业的实验室，检测设备，技术成熟，服务周到。另外，还有各种elisa试剂盒，应有尽有，可以交流经验。 在科研过程中，或检测时候，遇到各种问题，都可以交流。

1、蛋白样品不能反复冻融； 2、蛋白样品应加蛋白酶抑制剂，以增加蛋白的稳定性（建议最好能多加几中种蛋白酶抑制剂）； 3、细胞水平要做Western Blot，一般地5×106个细胞提取的蛋白够就足Western Blot； 4、如果目标蛋白是膜蛋白和胞浆蛋白，所用的去垢剂就要温和得多，建议提取后最好加上NaF去抑制磷酸化酶的活性； 5、若转膜不完全，可以加大上样量，还有转移时你可以用降低电流延长时间，转膜液中甲醇的比例多加5－10％； 6、如果上样量超载，

Western blotting（免疫印迹分析）是一种常用的蛋白质检测技术，用于检测样品中特定蛋白质的存在和定量。WB作为一个最为基础的生命科学检测方法之一，经过长时间摸索与分析，目前已经有了一系列适配性较高的通用WB实验检测方案和流程。但是蛋白质作为一个特异性较强的检测指标，总会有一些并不适用于常规化方法的个体，需要我们对实验步骤进行优化或者修改，才能保证得出一个较为理想的结果。 小分子蛋白 小分子蛋白主要指WB检测中小于20kDa

什么是细胞转染？ 细胞转染（Transfection）是指将外源性基因（如 DNA、RNA、蛋白质等）导入到细胞内的技术。转染的目的是产生重组蛋白，或特异性增强或抑制转染细胞中的基因表达。随着基因和蛋白功能的深入研究，转染已经成为科研实验中最常用的技术手段之一。研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用越来越广泛。 细胞转染的分类 根据导入的核酸存在于宿主细胞的时间长短，可以分为瞬时转染和稳定转染

实验技巧 | 一文了解细胞转染 细胞转染是指将外源分子（如DNA、RNA等）导入真核细胞的技术。目前，其已成为实验室工作中最常涉及的基本方法，是研究基因表达调控、突变分析等的常规工具。 转染方法大致可分为物理介导（如电穿孔法、显微注射和基因枪等）、化学介导（脂质体及其代替物、磷酸钙等）和生物介导（各类病毒，包括腺病毒、慢病毒、逆转录病毒、腺相关病毒等）三类途径。 细胞转染又分为瞬时转染和稳定转染，瞬时转染是指外源

实验技巧 | PCR引物设计，史上最全的关键点！ 1、引物最好在模板cDNA 的保守区内设计 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。 2、引物长度一般在15~30 碱基之间 引物长度（primer length）常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA 聚合酶进行反应。 3、引物GC 含量在40%~60%之间，

ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的生物化学分析技术，可用于判断受检标本中是否含有待检测抗原或抗体，是免疫反应的定性和定量检测方法，也是许多科研人员的日常实验之一。这么重要的实验，每个步骤可都不能疏忽，其中最最最关键的一步，也是整个实验的最后一步，便是我们今天要介绍的——酶标仪的分析。 酶标仪 酶标仪是酶联免疫吸附试验的专用仪器，它又称微孔板检测器。可简单地分为半自动和全自动两大类，但其工作原理基本

实验动物 成年SPF级雄性SD大鼠1只， 体重250g。 实验方法及步骤 01 外周血单个核细胞分离 ✦ （1）标本采集：取SPF 成年 SD 大鼠 1 只，3％戊巴比妥钠，按动物体重0.15 ml/100g，腹腔注射麻醉。无菌操作下腹主动脉采血6 ml，注入肝素抗凝管中。 （2）单个核细胞分离：采用密度梯度离心法， 向采集的血样标本内加入等量的PBS，取4支15ml离心管，分别加入大鼠淋巴细胞分离液各3ml，再缓缓向各离心管内加入上述含PBS血样各3ml，然后以2000r／min，水平离心20min，

Western blot的洗液TBST是实验室常用的配制液体，对于TBST的配方也基本上相差不多，其中配方中就有一种组分是Tween-20，一种黄色或琥珀色澄明的油状液体，具有特殊的臭气和微弱苦味。用移液枪吸取时会有一种滞后感。为什么在Western blot的洗液TBST中要加入这么一种试剂，Tween-20在Western blot 中在发挥什么样的作用呢？ 1、Tween-20 首先了解一下什么是Tween-20。Tween-20也写作Tween 20，也称Polyethylene glycol sorbitan monolaurate，中文名为吐温-20或吐温20。Tween-20为黄色或

细胞迁移(Cell migration)：因其类似体外伤口愈合过程，又名伤口愈合实验(Wound healing assay)，是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。可用于可以观察药物、基因等外源因素对细胞迁移、修复和相互作用的影响。 基本原理：在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕/伤口”，划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕/伤口”愈合，于细胞迁移过程中在开始和定期捕获图像，通过测量不同时间点的划痕间距并

细胞培养用的培养基是不是必须加双抗？血清在使用之前是不是一定要灭活？往培养基里加细胞因子又是什么操作？ 关于这三个问题，今天在这里分享一下我的看法。 要不要加双抗？ 在培养基中添加抗生素是一种常见的操作，其主要作用是抑制或杀死培养物中的某些细菌或真菌，从而避免它们对目标细胞的干扰和污染。 在培养实验中，选择适当浓度和种类的抗生素，可以有效地消除或减少杂菌、污染菌或其他不需要的微生物，保证培养物的纯度和

背景介绍： CHO细胞（Chinese hamster ovary cell，CHO）一个转化细胞系，1957年从中国仓鼠卵巢细胞得到。CHO细胞目前是现代制药企业进行研发、生产生物治疗药物 (单抗、酶、激酶和激素等) 中最常用的非人类哺乳动物细胞系。 细胞形态： 上皮样细胞，通常贴壁生长。 培养条件： 培养基无特殊要求，可有多种选择,一般用DMEM（高糖）培养基+10%胎牛血清+2%双抗。置于37℃,5%CO2的培养箱培养。 换液： 每隔48h换液，或当培养基呈现荧光黄色及时换液，否则细胞

包埋切片染色，细胞的流式与凋亡

1. 蛋白类型 确定你的蛋白是什么类型，蛋白类型决定你要使用的表达系统。 胞质蛋白——大肠杆菌系统 分泌蛋白——酵母表达系统（因为大肠杆菌系统缺乏翻译后修饰功能) 膜蛋白——杆状病毒或酵母表达系统 2. 酶切位点 分析目的蛋白DNA序列的酶切位点，使用T4连接酶的方式构建载体时，不要使用目的蛋白DNA序列包含的酶切位点，以防将目的蛋白的DNA序列切断。 3. 稀有密码子 定义：遗传密码子有64种，但是绝大多数生物使用密码子具有偏好性，倾

近期，科学家在《自然》杂志上发表的一项研究表明，这种小分子可通过两种不同的机制的机制来使肿瘤的生长速度受到抑制，进而可提高实验动物的生存率。研究人员报告说，这种分子可增强肿瘤对免疫攻击的敏感性，同时增加免疫细胞对抗肿瘤的活性。PTPN2、PTPN1蛋白可将细胞感知激活免疫细胞信号的能力关闭，这种分子通过抑制PTPN2、PTPN1蛋白发挥作用。研究人员发现，这种分子可通过抑制PTPN2/N1，使肿瘤细胞更容易受到攻击的同时，也使免疫细

康泰医学实验中心承接动物实验、细胞实验、病理实验、分子实验、蛋白实验等，已有15年科研历史，客户参与实验还可以提供住宿

西北农林科技大学的老师，南昊，以诈骗的形式骗取公司一些生物质粒和菌株产品，谎称后续会入订单，结果一直不入单，再联系就以各种理由拖延，拉黑。真丢一个科研工作者的脸，这种人就不适合在科研团队里，卑鄙无耻。满嘴谎言，油嘴滑舌，为了几千块钱，各种卑鄙无耻的谎言和承诺。